1．灭菌温度应是一个温度范围，而不是一个固定值，通常，培养基使用说明上灭菌温度是一个固定值，如：121℃，20min，其实121℃只是灭菌温度的下限，实际的灭菌温度在121℃～124℃（或123℃）之间波动。如果是自动控温型灭菌锅，设定好灭菌温度下限为121℃后，当温度升到124℃（或123℃）时，自动断电停止加热，当温度降到121℃时，自动开始加热；如果是手动控温型灭菌锅，当温度升到124℃时，手动切断电源停止加热，当温度降到121℃时，手动接通电源开始加热。
2．不同类型高压蒸汽灭菌锅对排放冷空气的不同要求
1.非自动控温型灭菌锅（手提式灭菌锅）
对于这类灭菌锅必须排尽冷空气，如果不排尽冷空气，冷空气热膨胀后对压力锅的工作压力有影响，造成压力和温度不能一一对应，显示的温度比锅内的实际工作温度高，灭菌锅的工作温度不能达到设定的杀菌温度，会影响灭菌效果。
2.自动控温型灭菌锅

自动控温型灭菌锅通过热敏电极监测锅内温度变化，显示屏上显示的温度是锅内真实的工作温度，在冷空气没有排尽的情况下，也能够保证灭菌的温度要求。由于饱和水蒸汽的灭菌效果.好，所以在使用自动控温型灭菌锅时，也应该排放冷空气，提高灭菌效果。

3.不同类型高压蒸汽灭菌锅初次使用的安全检查
1.非自动控温型灭菌锅
①手动打开安全阀，看安全阀是否正常；
②加热升温过程中，看压力表指针的上升状况是否有受阻情况发生，没有受阻，可正常使用。
2.自动控温型灭菌锅
①手动打开安全阀，看安全阀是否正常；
②加水时，观察水位指示灯是否正常显示水位状况；
③在排除冷空气的前提下， 观察显示屏上的温度和压力表指示温度的差，通常情况下，压力表上的温度略高于显示屏上的温度，此压力差如果不超过3℃，可正常使用。
4.影响灭菌效果的3个因素
1.水
水温应尽量低。温度不超过15℃。水的硬度值在0.7～2.0mmoL /L之间。
2.蒸汽的干燥程度
灭菌锅应使用干燥程度不小于0.9的饱和蒸汽，即蒸汽含水量不超过10%，金属负载状态下，干燥程度不小于0.95，以保持温度与压力符合线性关系。
3.灭菌时间
灭菌时间是指灭菌过程中灭菌室内达到规定温度后灭菌所需时间。操作中，应注意观察蒸汽的进汽速度和压力, 一般保持压力和温度同步上升。
5.液态物质灭菌要注意卸压不能过快
在对液态物质进行灭菌时，当灭菌结束注意卸压不能过快，尽量将排气阀关小，保持自然降压，保持系统原有的平衡，以防产生液体减少或喷溅现象。提醒：高压灭菌锅属于高压设备，操作人员需在当地特种设备监督部门考核取证。压力阀也要定期送专业部门检验。平日按照设备作业指导书规定要求使用和维护保养并做好记录。